Coleta e manuseio de amostras em testes de Homocisteína

Coleta e manuseio de amostras em testes de Homocisteína

[:pt]Uma vasta gama de distúrbios está associada a concentrações elevadas de Homocisteína total (Hmc). De defeitos de nascimento e complicações no parto, a transtornos psiquiátricos e deterioração cognitiva em idosos. Evidências sugerem ainda que a Hmc elevada seja um fator de risco para acidente vascular encefálico e doença cardíaca. A concentração de Hmc, quando elevada (por exemplo de 15 a 20 μmol/L), contribui para a patogênese da doença vascular aterosclerótica, aumentando a proliferação de células do músculo liso vascular, a disfunção do endotélio, o dano oxidativo, a síntese aumentada de colágeno e a redução da elasticidade da parede arterial.

As concentrações de Hmc aumentam naturalmente ao longo dos anos, tendo a contribuição de determinados fatores (idade, sexo, diferenças raciais e étnicas, estilo genético, dietético e de vida, por exemplo). Além disso, são mais elevadas nos homens e nos idosos. Por isso, é recomendada a medição de Homocisteína em pacientes de alto risco e seus familiares.

Ingestão de alimentos e variações diurnas e sazonais

Para que o teste de Homocisteína seja preciso, não há necessidade de jejum antes da coleta de sangue. É recomendada ao paciente uma refeição leve, com ingestão de alimentos de baixa proteína.

Uma refeição pequena não influencia as concentrações de Hmc total em pessoas saudáveis. Apenas a ingestão de uma refeição substancial e rica em proteínas pode aumentar sua concentração plasmática em 10-15% após 6-8 horas.

O fato pode explicar a variação das concentrações de Hmc ao longo do dia – mais baixas na parte da manhã e tarde, e mais altas à noite, não estando o plasma sujeito, muito provavelmente, à variação sazonal.

Preparação de soro ou plasma

Após a coleta do sangue, mas antes da remoção de suas células, há um aumento em Homocisteína que depende da temperatura. Isto acontece porque sua síntese ainda está ocorrendo dentro dos glóbulos vermelhos, sendo o aminoácido continuamente liberado no soro ou plasma. À temperatura ambiente, o aumento de Hmc é de cerca de 1 μmol/L por hora, independentemente de sua concentração inicial.

Isto corresponde a um aumento de 10% por hora à temperatura ambiente numa amostra típica com 10 μmol/L de Hmc. Portanto, é muito importante centrifugar amostras de sangue imediatamente após a coleta para separar o plasma e as células sanguíneas. Caso a centrifugação imediata de sangue total anticoagulado não seja possível, o aumento artificial de Hmc pode ser reduzido mantendo o sangue sobre gelo e separando o plasma das células em até uma hora.

A concentração de Homocisteína permanece estável durante pelo menos 48 horas à temperatura ambiente sem remoção de soro dos tubos, uma vez que o pano de gel impede a difusão de Hcm de células empacotadas para a fase de soro. Assim, é preferível a utilização de tubos SST para a determinação de Hmc, uma vez que simplifica o procedimento de colheita de sangue. Não é recomendado o uso de estabilizadores, pois alguns estabilizantes podem não ser compatíveis com os métodos de teste de Homocisteína total.

Para a preparação do plasma, os anticoagulantes recomendados são a heparina ou o EDTA. Para a preparação de soro, são recomendados tubos de SST (tubos de soro de gel) para separar células e soro por centrifugação durante 30 minutos.

Estabilidade da Homocisteína no plasma ou soro armazenado

Após a remoção das células sanguíneas, o Hmc no plasma ou no soro é estável. Não são observadas alterações durante pelo menos quatro dias à temperatura ambiente, durante várias semanas a 4° C, ou durante vários anos a -20° C.

Os ciclos de congelamento e descongelamento são geralmente bem tolerados. No entanto, após o congelamento, é frequentemente observado que a heterogeneidade da matriz da amostra é um problema comum. Neste caso, é necessária uma mistura completa das amostras após o descongelamento.

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